Tris鹽酸即三羥甲基甲�-鹽酸鹽Tris-HCl緩沖液,適用于大多數(shù)蛋白�(zhì)、核酸相�(guān)的研究實�,通常用它作為緩沖液應(yīng)用在蛋白�(zhì)SDS-PAGE電泳實驗�,電泳效果好分辨率高�
由Tris組成的生物緩沖液,常配成pH值為6.8�7.4�8.0�8.8。其pH值隨溫度變化相對較大。一般來說,溫度每升高一�,PH值下�0.03�1M Tris-HCl 6.8�1.5M Tris-HCl 8.8是SDS-PAGE最常用的試劑。Tris可溶解核酸和蛋白�(zhì)�
Tris鹽酸緩沖液原�
SDS-PAGE是相�(dāng)普遍的聚丙烯酰胺凝膠電泳,是以聚丙烯酰胺凝膠作為支持介質(zhì)的電泳技�(shù),適合蛋白質(zhì)以及寡核苷酸的分雀聚丙烯酰胺凝膠呈微觀�(wǎng)狀�(jié)�(gòu),具有分子篩效應(yīng),分為非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳(Native-PAGE)和SDS-聚丙烯酰胺凝膠(SDS-PAGE)兩種形式�
在蛋白質(zhì)SDS-PAGE不連續(xù)電泳實驗�,制膠緩沖液使用的是Tris-HCL緩沖系統(tǒng),濃縮膠是pH�6.7,分離膠pH�8.9;而電泳緩沖液使用的Tris-甘氨酸緩沖系統(tǒng)。在濃縮電泳凝膠�,其pH值呈弱酸�,因此甘氨酸只有很少量的會解�,其在電場的作用�,泳動效率低;而氯離子卻很�,兩者之間形成導(dǎo)電性較低的區(qū)�,蛋白分子就介于二者之間泳�。由于導(dǎo)電性與電場強度成反�,這一區(qū)帶便形成了較高的電壓梯度,壓著蛋白質(zhì)分子聚集到一�,濃縮為一狹窄的區(qū)��
�(dāng)樣品�(jìn)入分離膠后,由于膠中pH的增�,呈堿�,甘氨酸大量解離,泳動速率增加,直接緊隨氯離子之后,同時由于分離膠孔徑的縮�,在電場的作用下,蛋白分子根�(jù)其固有的帶電性和分子大小�(jìn)行分雀�
所�,pH對整個反�(yīng)體系的影響是至關(guān)重要�,實驗中在排除其他因素之后仍不能很好解決問題的情�,應(yīng)首要考慮該因�,當(dāng)然其他的因素也可以從多方面考慮�
Tris鹽酸由Tris與鹽酸混合制�,像氨基丁三醇、緩血酸胺�2-氨基-2-(羥甲基�-1,3-丙二醇等都是指的Tris,還可以用于其它各種緩沖液體��